დითიოთრეიტოლი (DTT) არის საყოველთაოდ გამოყენებული შემცირების აგენტი, რომელიც ასევე ცნობილია როგორც ახალი მწვანე დანამატი.ეს არის მცირე მოლეკულური ორგანული ნაერთი ორი მერკაპტანის ჯგუფით (-SH).მისი შემცირების თვისებების და სტაბილურობის გამო, DTT ფართოდ გამოიყენება ბიოქიმიისა და მოლეკულური ბიოლოგიის ექსპერიმენტებში.
DTT-ის მთავარი როლი არის ცილებისა და სხვა ბიომოლეკულების დისულფიდური ბმების შემცირება.დისულფიდური ბმა ცილის დაკეცვისა და სტაბილურობის მნიშვნელოვანი ნაწილია, მაგრამ გარკვეულ ექსპერიმენტულ პირობებში, როგორიცაა შემცირებული SDS-PAGE ანალიზი, ცილების რეკომბინაცია და დაკეცვა, აუცილებელია დისულფიდური კავშირის შემცირება ორ თიოლ ჯგუფამდე, რათა მოხდეს სივრცითი სტრუქტურის ამოხსნა. ცილა.DTT-ს შეუძლია რეაგირება მოახდინოს დისულფიდურ ობლიგაციებთან და შეამციროს ისინი მერკაპტანის ჯგუფებად, რითაც იხსნება ცილის სივრცითი სტრუქტურა და გაადვილებს ანალიზს და მანიპულირებას.
DTT ასევე შეიძლება გამოყენებულ იქნას ფერმენტის აქტივობისა და სტაბილურობის დასაცავად.ზოგიერთი ფერმენტით კატალიზებული რეაქციის დროს, ფერმენტის აქტივობა შეიძლება შემცირდეს ოქსიდანტის მიერ.DTT შეუძლია რეაგირება მოახდინოს ოქსიდანტებთან, რათა დაიყვანოს ისინი უვნებელ ნივთიერებებად, რითაც იცავს ფერმენტის აქტივობას და სტაბილურობას.
ტრადიციულ შემცირებულ აგენტებთან შედარებით, როგორიცაა β-მერკაპტოეთანოლი (β-ME), DTT ითვლება უფრო უსაფრთხო და სტაბილურ შემცირებულ აგენტად.ის არა მხოლოდ სტაბილურია წყალხსნარში, არამედ ინარჩუნებს შემცირების თვისებებს მაღალი ტემპერატურისა და მჟავა-ტუტოვანი პირობებში.
DTT-ის გამოყენება შედარებით მარტივია.ზოგადად, DTT იხსნება შესაბამის ბუფერში და შემდეგ ემატება ექსპერიმენტულ სისტემას.DTT-ის ოპტიმალური კონცენტრაცია უნდა განისაზღვროს კონკრეტული ექსპერიმენტის მიხედვით და ზოგადად გამოიყენება 0,1-1მმ დიაპაზონში.დაბალ კონცენტრაციას შეუძლია შეამციროს გვერდითი ეფექტები უჯრედების ზრდაზე და შეიძლება შეამციროს ციტოტოქსიკურობა სამიზნე ცილების გადაჭარბებული გამოხატვის გამო.უფრო მაღალმა კონცენტრაციამ შეიძლება გამოიწვიოს უჯრედების მეტაბოლური დატვირთვა, რაც გავლენას მოახდენს უჯრედების ზრდასა და ექსპრესიის ეფექტურობაზე.
ოპტიმალური კონცენტრაციის განსაზღვრის გზა შეიძლება იყოს სამიზნე ცილის ექსპრესიის დონის შეფასება სხვადასხვა კონცენტრაციაზე IPTG ინდუქციური ტესტების ჩატარებით.მცირე მასშტაბის კულტურის ტესტები შეიძლება ჩატარდეს IPTG კონცენტრაციების დიაპაზონის გამოყენებით (მაგ. 0.1 მმ, 0.5 მმ, 1 მმ და ა.შ.) და გამოხატვის ეფექტი სხვადასხვა კონცენტრაციებში შეიძლება შეფასდეს სამიზნე ცილის ექსპრესიის დონის გამოვლენით (მაგ. Western ბლოტის ან ფლუორესცენციის გამოვლენა).ექსპერიმენტული შედეგების მიხედვით, ოპტიმალურ კონცენტრაციად შეირჩა საუკეთესო ექსპრესიული ეფექტის მქონე კონცენტრაცია.
გარდა ამისა, თქვენ ასევე შეგიძლიათ მიმართოთ შესაბამის ლიტერატურას ან სხვა ლაბორატორიების გამოცდილებას, რათა გაიგოთ ხშირად გამოყენებული IPTG კონცენტრაციის დიაპაზონი მსგავს ექსპერიმენტულ პირობებში, შემდეგ კი ოპტიმიზაცია და მორგება ექსპერიმენტული საჭიროებების შესაბამისად.
მნიშვნელოვანია აღინიშნოს, რომ ოპტიმალური კონცენტრაცია შეიძლება განსხვავდებოდეს გამოხატვის სხვადასხვა სისტემებზე, სამიზნე ცილებსა და ექსპერიმენტულ პირობებზე, ამიტომ უმჯობესია ოპტიმიზაცია თითოეული შემთხვევის საფუძველზე.
მოკლედ, DTT არის საყოველთაოდ გამოყენებული შემამცირებელი აგენტი, რომელიც შეიძლება გამოყენებულ იქნას ცილებში და სხვა ბიომოლეკულებში დისულფიდური ბმების შესამცირებლად და ფერმენტის აქტივობისა და სტაბილურობის დასაცავად.იგი ფართოდ გამოიყენება ბიოქიმიისა და მოლეკულური ბიოლოგიის ექსპერიმენტებში.
გამოქვეყნების დრო: სექ-28-2023