როგორ განვსაზღვროთ ოპტიმალური კონცენტრაცია?
IPTG ინდუქტორისთვის (იზოპროპილ-ბეტა-დ-თიოგალაქტოზიდი), რაც უფრო მაღალია კონცენტრაცია, მით უკეთესი.ოპტიმალური კონცენტრაცია დამოკიდებულია კონკრეტულ ექსპერიმენტულ პირობებზე და სასურველ ინდუქციურ ეფექტზე.
ზოგადად, IPTG-ის კონცენტრაცია გამოიყენება 0,1-1 მმ დიაპაზონში.დაბალ კონცენტრაციას შეუძლია შეამციროს გვერდითი ეფექტები უჯრედების ზრდაზე და შეიძლება შეამციროს ციტოტოქსიკურობა სამიზნე ცილების გადაჭარბებული გამოხატვის გამო.უფრო მაღალმა კონცენტრაციამ შეიძლება გამოიწვიოს უჯრედების მეტაბოლური დატვირთვა, რაც გავლენას მოახდენს უჯრედების ზრდასა და ექსპრესიის ეფექტურობაზე.
ოპტიმალური კონცენტრაციის განსაზღვრის გზა შეიძლება იყოს სამიზნე ცილის ექსპრესიის დონის შეფასება სხვადასხვა კონცენტრაციაზე IPTG ინდუქციური ტესტების ჩატარებით.მცირე მასშტაბის კულტურის ტესტები შეიძლება ჩატარდეს IPTG კონცენტრაციების დიაპაზონის გამოყენებით (მაგ. 0.1 მმ, 0.5 მმ, 1 მმ და ა.შ.) და გამოხატვის ეფექტი სხვადასხვა კონცენტრაციებში შეიძლება შეფასდეს სამიზნე ცილის ექსპრესიის დონის გამოვლენით (მაგ. Western ბლოტის ან ფლუორესცენციის გამოვლენა).ექსპერიმენტული შედეგების მიხედვით, ოპტიმალურ კონცენტრაციად შეირჩა საუკეთესო ექსპრესიული ეფექტის მქონე კონცენტრაცია.
გარდა ამისა, თქვენ ასევე შეგიძლიათ მიმართოთ შესაბამის ლიტერატურას ან სხვა ლაბორატორიების გამოცდილებას, რათა გაიგოთ ხშირად გამოყენებული IPTG კონცენტრაციის დიაპაზონი მსგავს ექსპერიმენტულ პირობებში, შემდეგ კი ოპტიმიზაცია და მორგება ექსპერიმენტული საჭიროებების შესაბამისად.
მნიშვნელოვანია აღინიშნოს, რომ ოპტიმალური კონცენტრაცია შეიძლება განსხვავდებოდეს გამოხატვის სხვადასხვა სისტემებზე, სამიზნე ცილებსა და ექსპერიმენტულ პირობებზე, ამიტომ უმჯობესია ოპტიმიზაცია თითოეული შემთხვევის საფუძველზე.
გამოქვეყნების დრო: სექ-28-2023