4-ნიტროფენილ ბეტა-D-გალაქტოპირანოზიდი CAS:200422-18-0

ეფექტი: ONPG არის სუბსტრატი, რომელიც სპეციალურად გამოიყენება β-გალაქტოზიდაზას ფერმენტის არსებობისა და აქტივობის დასადგენად. როდესაც β-გალაქტოზიდაზას ფერმენტი არსებობს და აქტიურია, ის ONPG-ს ორ პროდუქტად ყოფს: ო-ნიტროფენოლად და გალაქტოზის წარმოებულად. ო-ნიტროფენოლის გამოთავისუფლება იწვევს ყვითელ ფერის ცვლილებას, რომლის გაზომვაც სპექტროფოტომეტრის გამოყენებით არის შესაძლებელი.

გამოყენება: ONPG-ს მოლეკულურ ბიოლოგიასა და ბიოქიმიაში რამდენიმე გამოყენება აქვს:

β-გალაქტოზიდაზას აქტივობის განსაზღვრა: ONPG ჩვეულებრივ გამოიყენება β-გალაქტოზიდაზას ფერმენტის აქტივობის გასაზომად და რაოდენობრივად განსაზღვრისთვის. ო-ნიტროფენოლის წარმოქმნის სიჩქარე, რომელიც ფერმენტის აქტივობის პირდაპირპროპორციულია, შეიძლება გაიზომოს სპექტროფოტომეტრიულად.

გენის ექსპრესია და რეგულაცია: ONPG ხშირად გამოიყენება გენის ექსპრესიისა და რეგულაციის კვლევებთან დაკავშირებულ ექსპერიმენტებში. ის ხშირად გამოიყენება შერწყმული ცილების ანალიზებში, როგორიცაა ფართოდ გამოყენებული lacZ შერწყმული სისტემა, კონკრეტული პრომოუტერების კონტროლის ქვეშ გენების ექსპრესიის შესასწავლად. ONPG-ის გამოყენებით გაზომილი ბეტა-გალაქტოზიდაზას აქტივობა იძლევა ინფორმაციას გენის ექსპრესიის დონის შესახებ.

β-გალაქტოზიდაზას აქტივობის სკრინინგი: ONPG შეიძლება გამოყენებულ იქნას კოლორიმეტრიული სკრინინგის მეთოდის სახით რეკომბინანტული დნმ ტექნოლოგიაში, β-გალაქტოზიდაზას კოდირების LacZ გენის არსებობისა და ფუნქციონალურობის დასადგენად. სკრინინგის ეს მეთოდი ხელს უწყობს საინტერესო გენის შემცველი კლონების იდენტიფიცირებას.

ფერმენტული კინეტიკის კვლევები: ONPG ასევე სასარგებლოა β-გალაქტოზიდაზას ფერმენტის კინეტიკის შესასწავლად. სხვადასხვა სუბსტრატის კონცენტრაციაზე ფერმენტ-სუბსტრატის რეაქციის სიჩქარის გაზომვით შესაძლებელია კინეტიკური პარამეტრების, როგორიცაა მიხაელის-მენტენის მუდმივები (Km) და რეაქციის მაქსიმალური სიჩქარე (Vmax), განსაზღვრა.